Comment procède-t-on au comptage des cellules :

Principe :

· La cellule de Malassez est une lame de verre spéciale comportant 2 rigoles qui délimitent une surface plane.
· Au centre de cette surface plane est tracé un quadrillage délimitant 100 carrés.
· Lorsqu'on place la lamelle, celle ci est maintenue à une certaine distance du quadrillage, délimitant un volume de 0,01 mm3.

Schéma d'une cellule de Malassez

Manipulations :

· Prélever la solution contenant les cellules avec une pipette pasteur et en déposer quelques gouttes sur la cellule de Malassez.
· Placer la lamelle par-dessus. Attention, à bien éviter les bulles d'air se coinçant sous la lamelle.
· Observer en commençant au plus faible grossissement, puis finir au plus fort grossissement. Si les cellules apparaissent trop nombreuses, réaliser une dilution de la solution initiale (Appeler le professeur dans ce cas).
· Faire la moyenne du nombre de cellules contenues respectivemment dans chacuns des 20 carreaux.
· Calculer le nombre de cellules présent dans le quadrillage en multipliant par 100 cette moyenne. Multiplier de nouveau par 100 le résultat obtenu pour obtenir le nombre de cellules dans un mm3.

Bilan :

Nombre de cellules par mm3 = moyenne des cellules par carré x 10000.

Protocole :

Nous avons mis sur pied un protocole expérimental pour mettre en évidence l’influence du facteur pH sur la croissance des levures.

Sur les 3 photos suivantes vous avez les différents produits et matériel que nous avons utilisé pour faire notre expérience, qui sont :
-trois erlenmeyers
-solutions tampon pH ([12], [7] et [5.4])
-suspension de levures fraîches
-solution de glucose à 20g.L-1
-une pipette jaugée de 5mL
-plusieurs pipettes pasteurs
-un verre à pied
-un microscope
-une cellule de comptage (mallassez)

- photo 1

- photo 2

-photo 3

Voici notre protocole que nous avons complémenté avec des photos qui introduisent nos manipulations en 10 étapes :

L’expérience consiste à introduire dans les trois erlenmeyers :
- 30 ml de tampon pH,
- 65 ml de glucose
- 5 ml de levures

Nous remuons le contenu des erlenmeyers pour homogénéiser le milieu.
Nous faisons des prélèvements du mélange à l’aide d’une pipette pasteur à différents moments.
Pour compter les levures, nous plaçons une goutte de la solution sur une cellule de malassez et, à l’aide du microscope, nous faisons la moyenne du nombre de cellules contenues dans un carré qui correspond à 1mm3.
On aboutit donc à la construction d’un graphe qui montre la croissance des levures au cours du temps en fonction du pH de la solution.

Voici notre protocole que nous avons complémente avec des photos qui introduisent nos manipulations en 10 étapes :

première étape :
on verse dans un Becher de l’eau ou l’on a au préalablement dissolue du glucose a 20g/L.

deuxième étape :
Avec une pipette graduée on prélève le glucose dissolu. de sorte a avoir 65ml dans chaque Erlenmeyer

- troisième étape :
On verse alors à chaque fois le glucose dans les Erlenmeyers de sorte à avoir 65ml dans chaque Erlenmeyer.

On peut faire de même pour les tampons mais nous avons préfèré essayer à l’aide d’une éprouvette graduée d’où les prochaines étapes.

- quatrième étape :
On verse dans un éprouvette graduée 30ml de tampon pH, pH = 4.5 pH= 12 et d‘eau du robinet à pH à peu prés égale à 6.5 d’après le papier pH que nous avons utilisé.

- cinquième étape :
On verse le tampon dans chaque milieu ( Erlenmeyer ).

- sixième étape :
On remue le bêcher contenant les levures de départ diluées dans de l’eau, pour homogénéiser le milieu et ainsi prélever un même nombre de cellules à chaque prélèvement.



Puis on prélève 5ml de levure a l’aide d’une pipette graduée.

- septième étape :
On verse les levures dans leurs nouveaux milieux que nous avons préparé avec les étapes précédentes.

- huitième étape :
Après avoir homogénéisé les nouveaux milieux on en prélève une petite quantité à l’aide d’une pipette du pasteur.

- neuvième étape :
On met de ce que l’on a prélèvé entre la lamelle et la cellule de malassez comme le schéma au-dessus du protocole.

- et la dernière étape, la dixième :
On observe au microscope les cellules de malassez pour le comptage !